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    • 能否進行外泌體中mRNA或lncRNA的檢測?

      除Small RNA外,也可以對外泌體中其他RNA進行檢測。但外泌體中的mRNA、lncRNA等大分子量RNA,含量較低、數量較少,并且穩定性比Small RNA差,容易發生降解,檢測的穩定性與重復性不如Small RNA。
    • 外泌體的分離采用哪一種技術更好?

      由于樣本性質和來源不一,目前仍沒有一種方法能兼顧外泌體得率、純度及生物活性。目前外泌體分離技術大致分為兩類:超速離心和提取試劑盒。

      超速離心:是囊泡分離的“金標準”,外泌體得率較高;但對實驗儀器要求特殊,耗時較長,無法實現高通量。

      提取試劑盒:基于外泌體表達的特異性表面抗原,利用相應的抗體通過免疫親和分離,無須超速離心,耗時較短,可實現高通量;但相比超速離心,外泌體得率較低。
      目前奧科醫學分離外泌體采用的是 Qiagen ExoEasy kit。

    • 哪些樣品類型適合開展外泌體Small RNA測序?

      外泌體主要存在于體液中,根據體液類型不同,其外泌體含量有較大差別,一般在血清/血漿中含量相對較高,而細胞培養上清、尿液、唾液等中外泌體含量偏低,因此建議優先選擇血清/血漿樣品進行相應實驗(細胞培養上清需要提供50 ml以上)。
    • 為什么裸鼠皮下注射腫瘤細胞開始成瘤,可見隆起,后來又消失了呢?

      這種情況其實還是沒有成瘤。成瘤過程一般是細胞注射后有圓形小包,然后很快消失,再隆起(一般是組織液),再變小變紅(血管生成),最后腫瘤快速生長。因此沒有成瘤只是第二階段,建議調整一下細胞注射量、更換實驗鼠或添加一些促進細胞生長的因子試試。

    • 轉錄組測序的技術重復性很高,那是否還有必要設生物學重復?

      有必要,至少需要兩次生物學重復,3次以上的生物學重復更好。2011年7月Hansen發表的文章表明生物學差異是基因自身表達的特性,與檢測技術的選擇以及數據處理的方式無關。如果不設生物學重復,高影響因子的雜志可能會因此而拒稿。

    • 樣本收集與儲存的注意點有哪些?

      四個要點需要注意:一是要快,盡快洗凈或處理,處理后快速冷凍。細胞可以直接用Trizol裂解后冷凍,組織洗凈后,分成小塊直接冷凍;二是低溫,先浸入液氮,數小時后再放入-70或-80度超低溫冰箱緩凍為佳。超低溫冰箱可以保存數月至一年以上,-20度不宜久存;三是避免溫度波動,一臺經常開關門,溫度上下波動的-80度冰箱,可能冷凍效果還不如一天穩定在-40度的冰箱;四是推薦進口凍存管,標簽冷凍后容易破碎,不妨自己用記號筆進行標記。

    • 如何避免組內差異過大的現象?

      組內差異大主要表現是組內老鼠有的長不出腫瘤組織,有的缺長得很大。原因很多,其一可能是接種懸液沒有搖勻,這種可能性較??;其二是可能存在一定的個體差異,鼠齡是一個很大的影響因素,建議控制好實驗條件,動物周齡控制在5-6周左右,體重均一,健康狀態一致。

    • 關于“樣品重復”,技術重復和上機重復有什么區別?發表的文章一般要求幾次重復呢?

      優先建議做3次實驗重復,符合一般的文章對實驗數據的要求,不建議使用兩重復或只做一次,可能引起審稿人和編輯的質疑。

      技術重復一般和上機重復非常類似,即上質譜的重復,即測試儀器的穩定性,判斷系統誤差等問題。而應用型的文章中,上機重復或技術重復一般沒有硬性規定,可以不做,如果做了當然最好,Editor就不會再此處找你的問題。

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